调制叶绿素荧光成像系统——M系列IMAGING-PAM

2010.09.02安装

保修至2011.09.02

德方工程师：Oliver Meyerhoff E-mail: omeyerhoff@walz.com

中方工程师：韩志国 13761793652 E-mail: walz@zealquest.com

1、操作步骤：

⑴先开PAM主机，再启动程序连接；

⑵如正常显微镜般通过目镜选择合适的视野，此时底灯开、CCD拉杆推入、荧光通道拉杆放在1或3位置；

⑶将CCD拉杆拉出、荧光通道拉杆放在2位置，选择程序中的live video，即可看到黑白像，此图像不可保存，如想存，则点NIR（近红外）测量后再保存，所用的光为近红外线，但是与可见光效果相似；

⑷目镜和通过CCD成的像的焦平面⑵略有不同，需要再次微调聚焦；

⑸关闭底灯（看荧光时必须关闭可见光），选择荧光测量模式，即可开始测量，一般选择F或Ft；

㈠image（第一个窗口）：

⑴如果荧光太弱：

①首先检查是否用对了颜色的光，一般来说，测量光的选择随藻的种类不同而不同：

	Red	Green	Blue
蓝藻	√	--	--
绿藻	√	--	√
硅藻	--	√	--

如果不确定是什么藻，可以先用白光看；

②然后调低Damping值至3（Damping值小，图像质量低，但成像速度快，所以调节阶段用较低的Damping值），再调高Gain值（Gain值升高，背景中的杂信号增多）；

③如荧光仍看不到，则调高ML光强（但是ML光强越低越好）;

⑵可通过右侧的add在画面中添加圆形、方形或多边形的区域，可显示该区域内的平均值；

⑶点饱和光测量，然后保存数据，此数据中保存了所有的值，在分析时均可调出；

⑷如果需要导出原始数据，可在report中直接将数据输出成excel格式。

㈡动力学曲线（第二个窗口）：

⑴在image窗口中选定感兴趣区域（AOI）；

⑵点start即可开始跑曲线，将显示所有选中区域的动力学曲线；

⑶ΔFm’=0.5ΔFm则作出的图比较好，如果ΔFm’＞0.5ΔFm，则AL偏弱；如果ΔFm’＜0.5ΔFm，则AL偏强。

㈢快速光响应曲线（L-curve，第三个窗口）：

⑴类似于phyto-PAM；

⑵若成的图中峰靠前，则可将最大的光强调小，即在较低的光强范围内多设几个梯度；如果峰靠后，则将最大光强调大。

㈣RGB-fit：顺次用红、绿、蓝光照射，最后拟合，分析视野中的藻是什么门；不是很准确，还是靠人判断；如果已知是什么藻，可通过调整参数帮助采集相应颜色的光，使得作出的图更好看。例如：已知是蓝藻，则加大蓝光比例，降低红光比例（绿光被默认为1，不可调）。

2、电池寿命三年，一般可达到五年；最长三个月一定要充电一次；若setting中显示电量不足（即使插在电源上），则表明电池可能需要更换；可自行更换。

3、移动整台仪器时将光纤、CCD拆下（均为螺丝）；配有专门六口螺丝刀；光纤需要插到底。

4、两根数据线连接电脑，USB+火线1394（两头都是六口）；火线为另配，因为原线的接口只能接较老型号的笔记本，无法接台式机；另配火线将数据直接传回电脑，是因为数据量太大，仪器的主机无法处理。

5、显微镜分为四部分，用螺丝组装。只要装正，保证水平即可。

6、最好接稳压器。

7、本仪器为了成像牺牲了别的指标，测出的yield值是不准确的，需要与phyto-PAM校正；每种藻都需要重新校正。

8、视野的有效面积约70%，即看样时尽量将目标藻放在视野中央区域，边缘杂信号过多。

9、 如需长时间观察，制片时须多留些液体，否则片子干、内部气体不多均会影响测量结果。

10、饱和光强度：对于玻片，7、8已经足够，较常用；饱和光过强也不好。

11、PAM测得的ETR值只是个相对值，比氧电极测出的大，氧电极测出的被认为是半绝对值。